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干細胞培養(yǎng)基的配制與保存

更新時間:2025-05-26點擊次數(shù):125
  干細胞培養(yǎng)基的制備和使用是干細胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵,但在實際操作中需要注意多個細節(jié)以確保細胞活性、穩(wěn)定性和實驗可重復(fù)性。
  一、干細胞培養(yǎng)基配制與保存:
  1.嚴(yán)格遵循配方
  根據(jù)干細胞類型選擇專用培養(yǎng)基配方,不可隨意替換成分或調(diào)整比例(如生長因子濃度、血清批號)。
  例:多能干細胞依賴bFGF和LIF維持未分化狀態(tài),神經(jīng)干細胞需要EGF/FGF-2組合。
  2.無菌操作
  全程在超凈工作臺內(nèi)操作,避免微生物污染(尤其血清、添加劑易滋生細菌)。
  分裝后的培養(yǎng)基需抽樣檢測無菌性(如細菌培養(yǎng)試驗)。
  3.現(xiàn)配現(xiàn)用原則
  生長因子和活性成分需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融失效。
  長期儲存需冷凍,使用時快速解凍并一次性用完。
  4.過濾除菌
  使用濾膜正壓過濾,避免高壓滅菌(高溫會破壞生長因子和蛋白質(zhì)成分)。
  5.保存條件
  短期保存:4℃冷藏(≤1周),避免反復(fù)開蓋污染。
  長期儲存:分裝后-20℃~-80℃冷凍,標(biāo)注名稱、濃度和日期。
  干細胞培養(yǎng)基關(guān)鍵注意事項:
  1.無菌操作
  全程在超凈工作臺內(nèi)完成,避免微生物污染(尤其血清和添加劑易滋生細菌)。
  分裝后培養(yǎng)基可抽樣檢測無菌性(如細菌培養(yǎng)試驗)。
  2.成分穩(wěn)定性
  生長因子、β-ME等活性成分需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融。
  長期儲存需冷凍,使用時快速解凍并一次性用完。
  3.批次一致性
  不同批次的血清或基礎(chǔ)培養(yǎng)基可能存在差異,需通過預(yù)實驗驗證穩(wěn)定性。
  建議使用同一批號血清,并記錄詳細信息(如供應(yīng)商、生產(chǎn)日期)。
 

 

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