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實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR，簡(jiǎn)稱(chēng)RT-QPCR,屬于Q-PCR的一種，目前該技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用，如：擴(kuò)增特異性分析、基因定量分析、基因分型、SNP分析等。熒光定量PCR常用的方法是DNA結(jié)合染料SYBRGreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法。SYBRGreenI是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長(zhǎng)的熒光染料，可與所有的各種序列的雙鏈DNA分子結(jié)合。在游離狀態(tài)下，SYBRGreenI發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合，嵌入至dsDNA，熒...

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如何選擇合適的細(xì)胞凋亡試劑盒

細(xì)胞調(diào)亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過(guò)程，并出現(xiàn)一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達(dá)和特定的生物大分子合成等。流式細(xì)胞儀可以對(duì)不同細(xì)胞凋亡的過(guò)程進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞膜完整性來(lái)反應(yīng)細(xì)胞凋亡是常用的流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡常用方法之一。其原理是：①用AnnexinV檢測(cè)早期凋亡細(xì)胞：AnnexinV可以結(jié)合細(xì)胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，不會(huì)被檢測(cè)到，凋亡時(shí)外翻到細(xì)胞膜外表面，可以被檢測(cè)到。②用PI或者7AAD檢測(cè)...

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CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)的方法

CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)的方法CCK-8法是細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性檢測(cè)常用的一種檢測(cè)方法，其具體操作方法如下：1.制備細(xì)胞懸液：選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞制作細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。2.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。3.將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃，5%CO2）12-24小時(shí)，使細(xì)胞達(dá)到指數(shù)期（培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異）。4.吸出各孔培養(yǎng)基，向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測(cè)藥物進(jìn)行干預(yù)。（實(shí)驗(yàn)組加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基，空白...

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CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟

CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟CCK-8實(shí)驗(yàn)可用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè)，也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)。使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，可間接性反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)量。使用CCK-8試劑盒進(jìn)行細(xì)胞活性檢測(cè)是一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法。CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟：一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：酒精燈、移液槍、酶標(biāo)儀（帶有450nm濾光片）、96孔培養(yǎng)板、CO2培養(yǎng)箱、CCK-8、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、PBS等。二、繪制曲線1....

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CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征CHO細(xì)胞是一種廣泛用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過(guò)多種方法來(lái)檢測(cè)和表征分離的囊泡，這些分析包括動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測(cè)量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。一、細(xì)胞培養(yǎng)1.培養(yǎng)基與細(xì)胞細(xì)胞可使用CHO系中的CHO-S細(xì)胞。培養(yǎng)基使用CD-CHO培養(yǎng)基（ThermoFisher）。在培養(yǎng)基中添加8mM...

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