18934597460
18934597460
技術文章
當前位置：首頁
技術文章
2023-215
DNA重組技術，是分子的生物學研究生需要掌握的實驗技術之一，DNA重組實驗方法總結如下：一、實驗目的體外連接獲得重組分子，用于轉化受體細胞。二、實驗原理DNA重組技術是用內切酶分別將載體和外源DNA切開，經分離純化后，用連接酶將其連接，構成新的DNA分子。外源DNA片段和質粒載體的連接反應策略有以下幾種：1、帶有非互補突出端的片段用兩種不同的限制性內切酶進行消化可以產生帶有非互補的粘性末端，這也是最容易克隆的DNA片段，一般情況下，常用質粒載體均帶有多個不同限制酶的識別序列組...
查看更多2023-215
PCR儀使用參數設定注意事項PCR儀使用參數設定不正確會影響到PCR實驗結果，這主要表現在溫度、時間和循環次數上，如果溫度參數設置過高，延伸時間不夠都會對實驗結果造成影響，下面談談使用PCR儀參數設定時的注意事項：一、溫度和時間溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模...
查看更多2023-215
丙酮酸羧化酶是細胞質和線粒體代謝途徑的重要元素，可以有效促進能量代謝。在CHO細胞中過表達酵母胞質丙酮酸羧化酶(PYC2)，可以增加丙酮酸流向TCA循環。增強的PYC2表達導致丙酮酸通量增加，從而使乳酸積累減少多達4倍，并顯著增加細胞密度和培養壽命。有了這個結果，與親本細胞相比，工程細胞的抗體表達顯著提高了70%，產品質量也有所提高（約3倍）。通過PYC2工程改造提升細胞性能，在丙酮酸、葡萄糖、乳酸和細胞能量代謝方面具有均高于親代細胞的各種優勢。PYC2工程改造原理和方法在補...
查看更多2023-214
A載體和外源DNA的酶切一、實驗目的學習和掌握核酸的酶切操作原理；通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA。二、實驗原理限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。絕大多數限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少數酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中，有的在對稱軸處切割，產生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'...
查看更多2023-214
質粒DNA的提取實驗方法和步驟一、實驗目的通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒的原理和步驟。二、實驗原理從細菌中分離質粒DNA的方法都包括3個基本步驟：培養細菌使質粒擴增；收集和裂解細胞：分離和純化質粒DNA。采用溶菌酶可以破壞菌體細胞壁，十二烷基磺酸鈉(SDS)和TritonX-100可使細胞膜裂解。經溶菌酶和SDS或TritonX-100處理后，細菌染色體DNA會纏繞附著在細胞碎片上，同時由于細菌染色體DNA比質粒大得多，易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性...
查看更多
